1.聚合酶链反应(PCR)及其相关技术 PCR技术是一种核酸体外特异扩增技术，具有敏感、特异、快速和简单等优点，是目前传染病实验室应急检测中应用最多的技术。

自PCR技术问世以来，派生出许多适用于不同目的的改良方法和技术，如模板为RNA的反转录PCR(reverse transcriptase PCR，RT-PCR)、能同时检测不同目的基因的多重PCR(multiplex PCR)、能提高扩增反应的敏感性和特异性的巢式PCR(nested PCR)、能对待测模板定量的实时荧光定量PCR以及新一代数字PCR。

实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，使PCR产物与荧光相关，利用荧光信号积累，实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对模板进行定量分析的方法。该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且整个PCR过程可实现自动化，且耗时短，操作方便，不易污染，在微生物检验方面已广泛应用。

新一代的数字PCR(Digital PCR)技术是基于单分子PCR方法来进行计数的核酸定量技术。采用微流控或微滴化方法，将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的核酸浓度，是一种绝对定量的方法。

2.核酸等温扩增技术 近年来，基于等温扩增的分子检测方法由于快速、灵敏且不需要温度循环仪器的特点，在现场快速检测中发挥越来越重要的作用。

等温扩增方法有很多种，近年发展比较快的有环介导的等温扩增(LAMP)技术以及在此基础上发展的多重LAMP检测技术、序列不依赖的等温扩增(SIIA)、重组酶介导的等温扩增(RT-RAA)等。

LAMP技术是一种比较公认的适合现场使用的核酸等温扩增检测技术，然而由于LAMP扩增产物大小多样、结构复杂等因素，限制了多重LAMP技术的发展和应用，不能实现高通量检测。江苏省疾病预防控制中心将LAMP检测技术与核酸级联侵入反应一纳米金显色技术相结合，研发了两套流感、禽流感病毒的多重LAMP检测技术，获得成功。第一套为季节性流感H1N1、H3N2和乙型流感FluB多重检测方案，第二套为2009甲型H1N1流感、H5N1禽流感和H7N9禽流感多重检测方案，病原的检测灵敏度均为10～100拷贝/反应。

序列不依赖的等温扩增(SIIA)技术主要用于微量RNA的线性扩增放大，产物主要为RNA，也有DNA，后续产物可用于PCR检测、芯片检测、高通量测序，适用于病原的筛查检测。

重组酶介导的等温扩增(RT-RAA)方法利用重组酶，在恒定温度下使引物和模板DNA发生链置换反应，并在不到30 min的时间内大量扩增模板DNA。该技术具有反应快速，特异性好，灵敏度高等特点。与RT-LAMP法相比，RT-RAA法的引物设计较为简单，反应时间更短。